临床检验中丙型肝炎病毒的常用检测项目及意义(2)
4 丙肝基因分型测定
HCV在复制时，由于多聚酶缺乏校正功能，复制过程中容易出错而导致变异率升高，所以HCV呈高度异质性，即HCV病毒基因有较强的变异性。HCV变异位点可以发生在基因组的各个区域，根据变异位点的不同，有几种基因分型系统。其中Simmonds系统是由Simmonds P等[11]建立的，它针对HCV基因组C区E1区和NS5区的核苷酸序列分析，将HCV分为6个主要的基因型以及70多种亚型，是目前通用的HCV分型命名系统。HCV基因型的金标准是利用RT-PCR扩增HCV基因组种系信息区(Ns5B、核心区或E1)并测序，测序的结果再与已知基因型序列比较。临床上应用基因特异性寡核苷酸探针或限制性片段长度多态性分析对HCV的NS5B和E1区域进行测序来确定HCV基因分型，两种方法均已标准化，能够测定HCV的6个基因型和一系列亚型。
目前，作为临床指导治疗的指标，HCV主要基因型就足够了，所以测序在临床实验室很少开展，而对HCV主要基因型进行分型比较普遍，主要有两种方法：①分子生物学分型技术，其已经商品化试剂和技术有Bayer的TRUGENE 5′NC HCV试剂盒和测序系统以及分析软件、自线性探针反向杂交技术(LiPA)、Invader-HCV检测技术、实时荧光PCR等。分子生物学的试剂盒虽然检测原理各有不同，但扩增的区域主要是5′-UTR区，这是因为5′-UTR区具有高度保守性.可以避免由于引物结合位点序列的突变而导致实验失败。同时也由于5′-UTR区不具有HCV其他区域的高度异质性，扩增5′-UTR区的方法也只能检测HCV主要基因型，在亚型方面的检测结果就差一些。②血清学分型技术，其根据HCV某些区域表达抗原具有与基因型对应的型别差异，合成特异性多肽作为包被抗原，对HCV血清抗体进行分型检测。血清学方法中Chiron公司的RIBA SIA检测NS4和核心区编码的抗原，可用来区分1~3型，Murex公司的Murex HCV利用基因型特异抗体直接检测NS4编码的抗原表位，能区分1~6型。血清学技术污染低、方法简单，适用于大样本量的流行病筛查。
, 百拇医药
丙型肝炎的基因分型应用在临床上主要是决定干扰素和利巴韦林的疗程和用量。根据AASLD丙型肝炎防治指南，干扰素和利巴韦林的联合治疗仍然是治疗丙型肝炎的最佳标准方案，大量的临床试验表明，当利巴韦林和干扰素联合治疗时，1型患者的治疗效果没有2、3型的效果好。用丙肝标准治疗(PEG-IFN-α加RBV 800 mg/d联合治疗)24周，基因2、3型患者的SVR达70%~80%，相反基因1型患者的SVR仅40%~50%，且需治疗48周。同时丙肝基因分型在流行病学，急性HCV感染转归，病情的严重性，肝脂肪变，IFN-α疗效以及疫苗的研制都具有十分重要的作用。
以上几种方法被普遍应用于临床，互相补充，对丙型肝炎的及早诊断和正确治疗起到非常重要的作用。
[参考文献]
[1]陶其敏,孙炎.丙型肝炎某些指标的检测及其临床意义[J].中华医学检验杂志,1994,17(2):69.
, 百拇医药
[2]唐君平,任卫国.丙型病毒性肝炎研究进展[J].重庆医学,1993,22(1):53.
[3]邱望龙,孙菊芬.82例HCV RNA阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析[J].中华传染病杂志,1994,12(1):1.
[4]冯国钢.丙型肝炎病毒临床检验技术研究进展[J].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(17):2781-2782.
[5]王国华,张贺秋,李少波,等.丙型肝炎核心抗原检测试剂的研制及初步应用[J].中国输血杂志,2004,17(5):11-14.
[6]钟锐兴,赖春颜,梁东等.酶免疫法检测丙型肝炎病毒核心抗原的应用价值[J].现代医药卫生,2009,25(7):1030-1031.
[7]王学波.实时荧光定量PCR技术在医学诊断中的应用[J].中外医学研究,2010,8(9):28-29.
, http://www.100md.com
[8]郭建平,高建恩.丙型肝炎病毒NS 3区优势表位基因的克隆和高效表达研究[J].中华医学检验杂志,1994,17(2):71.
[9]谭晓霞,纪勇平,骆昊翠.丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值[J].检验医学,2010,25(2):134-136.
[10]杨瑞锋,魏来.乙型和丙型肝炎病毒核酸检测技术及进展[J].中华医学检验杂志,2010,33(5):476-480.
[11]Simmonds P,Holmes EC,Cha TA,et al.Classification of hepatitis C virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic Analysis of the NS-5 region[J].J Gen Virol,1993,74(Pt11):2391-2399.
(收稿日期：2011-04-12), http://www.100md.com(张萧)
HCV在复制时，由于多聚酶缺乏校正功能，复制过程中容易出错而导致变异率升高，所以HCV呈高度异质性，即HCV病毒基因有较强的变异性。HCV变异位点可以发生在基因组的各个区域，根据变异位点的不同，有几种基因分型系统。其中Simmonds系统是由Simmonds P等[11]建立的，它针对HCV基因组C区E1区和NS5区的核苷酸序列分析，将HCV分为6个主要的基因型以及70多种亚型，是目前通用的HCV分型命名系统。HCV基因型的金标准是利用RT-PCR扩增HCV基因组种系信息区(Ns5B、核心区或E1)并测序，测序的结果再与已知基因型序列比较。临床上应用基因特异性寡核苷酸探针或限制性片段长度多态性分析对HCV的NS5B和E1区域进行测序来确定HCV基因分型，两种方法均已标准化，能够测定HCV的6个基因型和一系列亚型。
目前，作为临床指导治疗的指标，HCV主要基因型就足够了，所以测序在临床实验室很少开展，而对HCV主要基因型进行分型比较普遍，主要有两种方法：①分子生物学分型技术，其已经商品化试剂和技术有Bayer的TRUGENE 5′NC HCV试剂盒和测序系统以及分析软件、自线性探针反向杂交技术(LiPA)、Invader-HCV检测技术、实时荧光PCR等。分子生物学的试剂盒虽然检测原理各有不同，但扩增的区域主要是5′-UTR区，这是因为5′-UTR区具有高度保守性.可以避免由于引物结合位点序列的突变而导致实验失败。同时也由于5′-UTR区不具有HCV其他区域的高度异质性，扩增5′-UTR区的方法也只能检测HCV主要基因型，在亚型方面的检测结果就差一些。②血清学分型技术，其根据HCV某些区域表达抗原具有与基因型对应的型别差异，合成特异性多肽作为包被抗原，对HCV血清抗体进行分型检测。血清学方法中Chiron公司的RIBA SIA检测NS4和核心区编码的抗原，可用来区分1~3型，Murex公司的Murex HCV利用基因型特异抗体直接检测NS4编码的抗原表位，能区分1~6型。血清学技术污染低、方法简单，适用于大样本量的流行病筛查。
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丙型肝炎的基因分型应用在临床上主要是决定干扰素和利巴韦林的疗程和用量。根据AASLD丙型肝炎防治指南，干扰素和利巴韦林的联合治疗仍然是治疗丙型肝炎的最佳标准方案，大量的临床试验表明，当利巴韦林和干扰素联合治疗时，1型患者的治疗效果没有2、3型的效果好。用丙肝标准治疗(PEG-IFN-α加RBV 800 mg/d联合治疗)24周，基因2、3型患者的SVR达70%~80%，相反基因1型患者的SVR仅40%~50%，且需治疗48周。同时丙肝基因分型在流行病学，急性HCV感染转归，病情的严重性，肝脂肪变，IFN-α疗效以及疫苗的研制都具有十分重要的作用。
以上几种方法被普遍应用于临床，互相补充，对丙型肝炎的及早诊断和正确治疗起到非常重要的作用。
[参考文献]
[1]陶其敏,孙炎.丙型肝炎某些指标的检测及其临床意义[J].中华医学检验杂志,1994,17(2):69.
, 百拇医药
[2]唐君平,任卫国.丙型病毒性肝炎研究进展[J].重庆医学,1993,22(1):53.
[3]邱望龙,孙菊芬.82例HCV RNA阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析[J].中华传染病杂志,1994,12(1):1.
[4]冯国钢.丙型肝炎病毒临床检验技术研究进展[J].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(17):2781-2782.
[5]王国华,张贺秋,李少波,等.丙型肝炎核心抗原检测试剂的研制及初步应用[J].中国输血杂志,2004,17(5):11-14.
[6]钟锐兴,赖春颜,梁东等.酶免疫法检测丙型肝炎病毒核心抗原的应用价值[J].现代医药卫生,2009,25(7):1030-1031.
[7]王学波.实时荧光定量PCR技术在医学诊断中的应用[J].中外医学研究,2010,8(9):28-29.
, http://www.100md.com
[8]郭建平,高建恩.丙型肝炎病毒NS 3区优势表位基因的克隆和高效表达研究[J].中华医学检验杂志,1994,17(2):71.
[9]谭晓霞,纪勇平,骆昊翠.丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值[J].检验医学,2010,25(2):134-136.
[10]杨瑞锋,魏来.乙型和丙型肝炎病毒核酸检测技术及进展[J].中华医学检验杂志,2010,33(5):476-480.
[11]Simmonds P,Holmes EC,Cha TA,et al.Classification of hepatitis C virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic Analysis of the NS-5 region[J].J Gen Virol,1993,74(Pt11):2391-2399.
(收稿日期：2011-04-12), http://www.100md.com(张萧)