1.3成纤维细胞的原代培养和体外扩增：取小鼠剩余皮片，尽可能彻底地修除表皮和皮下脂肪，将真皮剪成0.5～1.0mm2的组织块，接种于培养瓶内，消化下来的细胞置37℃恒温培养箱中培养4h后，再加入含150ml/L胎牛血清的DMEM培养液继续培养，每3天换液1次。原代培养细胞基本长满瓶壁后，进行传代培养。取第5代或6代的细胞用于以下实验。

    1.4 细胞形态学观察：取第5代细胞在相差显微镜下观察细胞形态、生长状态及贴壁时间，并摄片记录。

    1.5 MTT法测定细胞活性：取第5代平滑肌细胞和成纤维细胞分别以1:1、1:2、1:3(细胞数量为4000/孔)的比例接种于96孔培养板中，每孔加入200μl培养液于37℃，体积分数为0.05的CO2条件下培养。每天同一时间点随机抽取5孔细胞，加入5%MTT 20μl/孔，培养4～6h，吸出液体，每孔加150μl二甲基亚砜振荡10min，酶联免疫测定仪测定波长490nm处的吸光度。取5孔吸光度的均值，以时间(天)为横坐标，吸光度值为纵坐标绘图。

    1.6 以胶原凝胶为基质的联合培养模型的构建：①1:1组：取生长状态良好的平滑肌细胞用Hoechst 33342标记，将其与真皮成纤维细胞按1:1比例各以1.5×106/ml的密度与3mlI型胶原(胶原浓度8mg/ml ......